Evaluación del efecto citotóxico y antitumoral del extracto de Tagetes erecta L. en modelos experimentales de carcinoma pulmonar de Lewis in vitro e in vivo

Abstract

Introducción: El cáncer de pulmón es la enfermedad oncológica que presenta la mayor mortalidad a nivel mundial, cifras que han aumentado debido a la limitada disponibilidad de tratamientos terapéuticos eficaces. En los últimos años, la búsqueda de agentes antitumorales a partir de plantas empleadas en la medicina tradicional ha cobrado mayor importancia, al representar una amplia fuente de sustancias bioactivas. Una de estas especies, Tagetes erecta, es una planta de gran valor etnobotánico y cultural que, de acuerdo con recientes reportes, es capaz de inducir efectos citotóxicos sobre distintas líneas tumorales haciendo uso de sus extractos. Sin embargo, hay poca evidencia de la actividad antitumoral del extracto de Tagetes erecta en modelos experimentales de cáncer de pulmón. Objetivo: Evaluar la actividad anticancerígena in vitro e in vivo del extracto de Tagetes erecta L. (TE) en un modelo de carcinoma pulmonar. Metodología: Flores y hojas frescas de TE fueron maceradas con etanol hasta obtener extractos hidroalcohólicos sólidos y su caracterización fitoquímica se realizó mediante una cromatografía de gases acoplado a masas. Estos extractos fueron empleados en un bioensayo de toxicidad en Artemia Salina, evaluando distintas concentraciones (50 mg/ml, 5 mg/ml, 50 μg/ml, 5μg/ml, 50 ng/ml y 5 ng/ml) durante 24 horas. Además, se realizó un ensayo de citotoxicidad con colorante azul de tripán en las líneas celulares COS-1 (fibroblastos de riñón de mono) y LLC (carcinoma pulmonar de Lewis), evaluando también distintas concentraciones (5, 50 y 500 μg/ml) de ambos extractos durante 24 h. El efecto antiproliferativo se determinó mediante el ensayo de cristal violeta. El extracto con mayor citotoxicidad in vitro (EFTE) fue evaluado en el modelo animal de carcinoma pulmonar por xenoinjerto, donde se implantaron 1x106 células LLC en el dorso de ratones C57BL/6. A los 6 días post-implantación, se administraron por vía intraperitoneal los tratamientos correspondientes a cada grupo (Grupo 1: Sin tratamiento, Grupo 2: Etopósido 9 mg/Kg, Grupo 3: 400 mg/Kg/Día EFTE, Grupo 4: 9 mg/Kg de etopósido + 400 mg/Kg/ Día EFTE). Se midió el volumen tumoral durante 15 días en los ratones; posteriormente se realizó su 7 sacrifico y los tumores fueron removidos para su análisis histopatológico tras tinción con hematoxilina y eosina, llevando a cabo la evaluación microscópica de áreas necróticas y número de mitosis. Resultados: Se obtuvieron rendimientos de 2.85% de extracto de hojas (EHTE) y 1.44% de extracto floral (EFTE). Los compuestos mayoritarios presentes en el extracto corresponden a 2,3-dihidro-benzofuran, ácido octadecanóico, ácido bencenacético, ácido oléico, ácido linoléico y ácido acético. Ningún extracto evidenció toxicidad en Artemia salina, ni en la línea celular no tumoral COS-1. Sin embargo, el extracto de flores generó el mayor efecto citotóxico en la línea celular LLC con un 60%, comparado con el extracto hojas (20 %). La combinación del extracto floral y etopósido disminuyó la proliferación celular en un 20% en la línea de carcinoma pulmonar de Lewis. En el modelo in vivo, la administración de extracto floral de TE redujo en 70% el volumen tumoral de los ratones implantados con células LLC, respecto al control. El análisis histopatológico mostró que la administración del extracto floral de TE disminuye la cuenta mitótica hasta 20 mitosis por campo y disminuye la viabilidad tumoral en un 45%, obteniéndose los mejores resultados cuando el extracto es combinado con etopósido. Conclusión: El extracto hidroalcohólico de flores y hojas de TE tienen efecto citotóxico en células de carcinoma de pulmón de Lewis. Además, muestran ser selectivos a líneas celulares cancerígenas. El presente estudio indica que el extracto de flores de TE inhibe la progresión tumoral y además incrementa su efectividad en combinación con etopósido. Los resultados contribuyen a la evidencia de que los compuestos bioactivos presentes en el extracto hidroalcohólico de TE poseen potencial terapéutico contra el cáncer de pulmón.