Resumen:
La epilepsia es una afección común en la mujer embarazada, aproximadamente 1
de cada 200 embarazadas se encuentra expuesto a fármacos antiepilépticos, siendo el
levetiracetam (LEV) el fármaco de mayor uso durante el embarazo. La placenta es una
barrera de circulación materna fetal, por lo que el grado de exposición fetal a sustancias
exógenas será determinado por el transporte y la biotransformación a nivel placentario
de dichas sustancias. El objetivo del presente trabajo fue determinar la expresión génica
placentaria del gen Slc38A4 en ratones BALB/c y correlacionarlo con la concentración
sérica de LEV. Se validó el método analítico por HPLC/UV para la cuantificación del
fármaco, bajo lo establecido por la NOM-177-SSA1-2013, utilizando como estándar
interno captopril y una columna fase reversa C18 (5 μm, 150 x 4,6 mm). La expresión
génica se determinó en modelo murino (ratones hembra Balb-c preñadas),
administrando una dosis de 100 mg/kg/día de LEV, el sacrificio fue a los 13 y 18 días de
gestación. Se obtuvo sangre mediante punción cardiaca y se obtuvieron medidas
antropométricas de los productos no natos, así como las placentas para extraer RNA y
se evaluó la expresión del gen mediante q-PCR. También se cuantificó malondialdehído
(MDA) para determinar el estrés oxidativo en hígado, riñón y productos fetales. El
método analítico validado presentó exactitud, precisión, linealidad, selectividad y
reproducibilidad en las siguientes condiciones cromatográficas: fase móvil ácido
fosfórico 0.43%: acetonitrilo (90:10), pH 6.8, longitud de onda de 231 nm, flujo de 1.5
mL/min, volumen de inyección de 15 µl, tiempo de corrida de 8 min, tiempos de
retención de 1.56 ± 0.07 y 3.9 ± 0.125 min para el estándar interno y LEV
respectivamente. En relación con las medidas antropométricas de los productos no
natos (número de productos, peso, talla y ancho), los resultados muestran un
decremento en el número de productos en las ratonas expuestas a LEV en el día 13 de
gestación, de igual manera, se observó un decremento en el peso y talla de los productos
expuestos a LEV en comparación con los no expuestos. Referente a la peroxidación
hepática, los animales gestantes presentaron concentraciones mayores de MDA que los
no gestantes, de igual manera, los expuestos a LEV presentan un aumento en las
concentraciones de MDA en comparación con los no expuestos. Con respecto a la
peroxidación renal, la gestación no se asoció a un incremento del estrés oxidativo a nivel
renal, ni con la exposición a LEV. En cuanto a la peroxidación fetal, el tiempo de gestación
incrementa las concentraciones de MDA en los productos no natos. Por otra parte, la
expresión del gen Slc38a4 decrementa a los 13 días e incrementa a los 18 días en el
grupo expuesto a LEV en relación con el no expuesto.
Descripción:
Epilepsy is a common condition in pregnant women, approximately 1 in 200 pregnant
women is exposed to antiepileptic drugs, levetiracetam (LEV) being the drug of most use during
pregnancy. The placenta is a barrier to fetal maternal circulation, so the degree of fetal exposure
to exogenous substances will be determined by the transport and biotransformation of these
substances at the placental level. The objective of the present work was to determine the
placental gene expression of the Slc38A4 gene in BALB/c mice and to correlate it with the serum
concentration of LEV. The analytical method was validated by HPLC / UV for drug quantification,
according to the NOM-177-SSA1-2013, captopril was used as internal standard and a reverse
phase column C18 (5 μm, 150 x 4,6 mm). Gene expression was determined in a murine
model (pregnant Balb-c female mice), a dose of 100 mg/kg/day LEV was administered,
the mice sacrifice was at 13 and 18 days of gestation. Blood was obtained by cardiac
puncture and anthropometric measurements of non-native products were obtained, as
well as the placentas to extract RNA and gene expression was evaluated by q-PCR.
Malondialdehyde (MDA) was also quantified to determine oxidative stress in liver,
kidney, and fetal products. The validated analytical method presented accuracy,
precision, linearity, selectivity and reproducibility with the following chromatographic
conditions; mobile phase 0.43% phosphoric acid: acetonitrile (90:10), pH 6.8,
wavelength of 231 nm, flow of 1.5 mL / min, injection volume of 15 µl, run time of 8 min,
retention times of 1.56 ± 0.07 and 3.9 ± 0.125 min for the internal standard and LEV
respectively. In relation to the anthropometric measurements of unborn products
(number of products, weight, size, and width), results show a decrease in the number of
products in mice exposed to LEV on day 13 of gestation, similarly, a decrease in the
weight and size of the products exposed to LEV was observed compared to those not
exposed. Regarding liver peroxidation, pregnant mice had higher concentrations of MDA
than non-pregnant mice, similarly, those exposed to LEV show an increase in MDA
concentrations compared to those not exposed. Regarding renal peroxidation,
pregnancy was not associated with increased oxidative stress at the renal level, nor with
exposure to LEV. Regarding fetal peroxidation, the gestation time increases the
concentrations of MDA in non-native products. On the other hand, the expression of the
Slc38a4 gene decreases at 13 days and increases at 18 days in the group exposed to LEV
in relation to the not exposed group.